Koestruktuuride tuvastamine, antikehadeja patogeenid immunomärgise abil on populaarne, kaasaegne ja täpne. Immunofluorestsents viitab immunomärgistamisele fluorestsentsiga antikehade mis on pandud UV-valguse käes hõõguma. Immunofluorestsentsi otsesel avastamisel uuritakse testitavat substraati otse luminestsentsiga antikehadeilma primaarsete antikehade või tehisantigeenideta.
Mis on immunofluorestsentsi otsene tuvastamine?
Kasvaja spetsiifilisi antigeene saab kasvajakoes tuvastada otse immunofluorestsentsiga. Seega on võimalik teada saada, kus kehas olemasolev on metastaasid tuli. Immunofluorestsentsi otsene tuvastamine on diagnostiline meetod, mis põhineb immunoloogia, immunovärvimise ja immunohistokeemia leidudel. Siin keskendutakse antikehade võimele seonduda koe spetsiifiliste kohtadega või seerumi antigeenidega. Need saidid on epitoopid. Biokeemilises diagnostikas on kunstlikke antikehi või mimeetikume (ainsuses: mimeetilisi), mis võimaldavad neid antikeha-antigeeni sidemeid märgistada fluorestsentsi või radioaktiivsuse abil. Kunstlike antikehade konjugaadid seonduvad tegelikult ühelt poolt epitoopidega ja teiselt poolt omavad immunofluorestsentsi korral fluorestsentsmarkerit. See on alternatiiv radioaktiivsete markerite kasutamisele. Immunofluorestsents-otsedetektsioonide eripära võrreldes kaudsete detekteerimistega on see, et antikeha, mis seondub uuritava materjali antigeeni epitoobiga, on samal ajal juba antikeha konjugeeritud fluorestsentsmarkeriga. Otseseks avastamiseks ei ole interpositsiooni jaoks vaja täiendavaid antikehi. Immunofluorestsentsi korral fluorestseiin, mis helendab UV-valguses, ja fluorestseiini isotiotsüanaati (FITC) kasutatakse värvained kunstlike antikehade konjugaatide konstrueerimiseks. Niipalju kui see on natuke keeruline, on immunofluorestsents-otsedetektsioonid meditsiiniliste meetodite standardmeetodid laboridiagnostika paljude erinevate meditsiiniliste probleemide jaoks. Fluorestseerivat värvi sisaldavad antikehad on müügiks valmis.
Funktsioon, mõju ja eesmärgid
Koeuuringuteks on saadaval koe spetsiifiliste struktuuride määrimiseks immunofluorestsents-otsedetektorid. Kuid need on olemas ka üksikute rakkude jaoks. Seal mängib suurt rolli voolutsütomeetria. Ja lõpuks on olemas immuunanalüüsid, mis koosnevad tahkest ja vedelast faasist. Kudede immunofluorestsentsuuringud on olulised eelkõige onkoloogias, st vähk. Kasvaja spetsiifilisi antigeene saab kasvajakoes tuvastada otse immunofluorestsentsiga. Need kasvajakoeproovide uuringud on sageli olulised, et teada saada, kus kehas olemas on metastaasid pärinevad või on samuti tehtud otsuse kohta, kas kasvaja on healoomuline või pahaloomuline. Üksikute rakkude uurimist immunofluorestsentsi otsese tuvastamisega kasutatakse viirusantigeenide, bakteriaalsete antigeenide ja muude epitoopide leidmiseks. Näiteks saab teada, kas rakud on nakatunud viirusega ja millises nakatumistsükli etapis rakud on. FACS (= fluorestsentsiga aktiveeritud rakkude sorteerimine) on üliefektiivne voolutsütomeetria meetod, kus fluorestseeruvalt märgistatud rakud jaotatakse erinevatesse katseklaasidesse sõltuvalt värvimise tüübist. See meetod on oluline immunoloogias, Hematoloogia ja infektoloogia. Immunofluorestsents-immunotestid võimaldavad otseselt avastada keskkonnamürke, geneetiliselt muundatud organisme ja teatud toidus sisalduvaid lisaaineid. Selles eksperimentaalses seadistuses on alati tahke ja vedel faas. Arvukalt patogeenid, Sealhulgas AIDS- põhjustades HI-viirust, saab tuvastada ka otse. Kuid nakkusliku ja autoimmuunhaigused, eesmärk on sageli antikehade, mitte antigeenide tuvastamine. Need on kaitse molekulid toodetud keha enda poolt immuunsüsteemi. Sellised avastused ei ole siis siin esitatud definitsiooni kohaselt otsesed tuvastused, kuna fluorestseeruvad antikehad ei seondu mitte otse keha enda antigeenidega, vaid testikomplekti antigeenidega. Need katsesõlme antigeenid seovad endogeenseid antikehi. Ainult spetsiaalsetes avastamis- ja kinnituskatsetes kasutatakse otseseid immunofluorestsents-detektsioone tavaliste infektsioonide korral, näiteks viirused ja Chlamydia. On teste paljude teiste haiguste suhtes. Enamikus olukordades on antikehade kaudne tuvastamine parem nakkushaigused sest keha oma immuunsüsteemi tal on geniaalne võime varasemaid nakkusi meelde jätta. Teistes olukordades täiendavad antigeenide otsene tuvastamine ja antikehade kaudne tuvastamine üksteist. Viimased näitavad, et infektsioon on esinenud varem, samas kui esimesed annavad täpsemat teavet patogeeni aktiivsuse praeguse seisundi kohta.
Riskid, kõrvaltoimed ja ohud
Immunofluorestsentsi otsesel avastamisel, nagu kogu meditsiinilisel avastamisel, on kaks riski: valepositiivse tulemuse ja valenegatiivse tulemuse oht. Valepositiivsed tulemused põhjustavad patsiendile psühholoogilist ebamugavust ja väga suurt stressi. Seetõttu lisatakse positiivsetele tulemustele täiendavaid testimisprotseduure, eriti kui diagnoos viib drastiliste elumuutusteni. Vale negatiivse tulemuse oht on see, et patsient ei õpi õigeaegselt enda ohtu tervis ja võib-olla isegi rahvatervisele. Seetõttu on hea teha palju uuringuid ja teha müügiks valmis suur hulk erinevaid immunofluorestsents-otsedetektsioone ja neid pakkuda. Koos teiste haiguste ja patoloogiate otsese ja kaudse tuvastamise meetoditega suurendab see diagnoosi täpsust. Otsesed tuvastamised põhinevad antikeha konjugaadil, mis ühelt poolt seondub antigeenide epitoopidega ja teiselt poolt põhjustab samal ajal ka fluorestsentsi. Seepärast kasutatakse sellist toodet ainult ühte tüüpi katsemenetlustes ja seda ei kasutata muud tüüpi katsete jaoks. See on oluline protseduuriline erinevus kaudse tuvastamise korral, kus primaarseid antikehi kasutatakse epitoobi sidumiseks fluorestseeruvatest antikehadest ülesvoolu. Seega sobib antikeha konjugaat erinevateks testideks. See protseduuriline erinevus erineb meditsiinilisest erinevusest antikehade kaudse tuvastamise ja antigeenide otsese tuvastamise vahel.
