Kliiniliselt üksi, st süüfilis sümptomeid, ei saa diagnoosi panna, kuna süüfilise sümptomid võivad olla väga erinevad ja pole konkreetsed. Seetõttu mikroskoopiline ja seroloogiline süüfilis test tuleb läbi viia. T. pallidum bakterit ei ole võimalik kultiveerimiskeskkonnas kasvatada. Mikroskoopilise diagnoosi korral süüfilis testis võetakse nahalt mustus ja limaskest muutub, ning saadud sekretsiooni uuritakse pimeda välja mikroskoobi all. Tavalise valgusmikroskoobi all bakterid ei saa tuvastada, kuna need on liiga õhukesed. Lisaks tüüpilisele struktuurile, väikese läbimõõduga, isegi rullid, kiire painutamine ja venitus Iseloomulik on liikumine bakterikeha keskel. Positiivne testi tulemus on tõend haiguse kohta, kuid negatiivne tulemus ei välista süüfilist. Seroloogilises diagnostikas tehakse antikehade skriiningtestid, mis on positiivsed 2–4 nädalat pärast nakatumist. Antikehad tuvastatakse patogeenide pinnal tekkinud antigeenide vastu bakterid. TPHA test (T. pallidum hemaglutinatsiooni test, mida tänapäeval nimetatakse ka TPPA testiks) on tundlik ja väga spetsiifiline otsingureaktsioon, mille käigus antikehade T. pallidumi klompi (aglutineeritud) vastu punane veri lahtrid (erütrotsüüdid), mis on laetud T. pallidumi antigeeniga. See muutub positiivseks 2. nädalal pärast süüfilisega nakatumist ja püsib nii palju aastaid pärast haiguse paranemist (“seronar”). Varases algstaadiumis võib see olla endiselt negatiivne. Testi kasutatakse süüfilise kahtluse korral, aga ka tavaliseks skriinimiseks varane rasedus, Ning veri doonorid ja verekonservid. Positiivsed tulemused nõuavad kinnituskatset: FTA-ABS testis (fluorestsentstreponema antikehade imendumistest) bakterid kinnitatakse slaidile ja tuuakse kokku veri seerum, vere vedel osa. The antikehade seejärel seotakse vereseerumis bakterite antigeenide külge. Pärast seerumi loputamist märgitakse antikehad uuesti teiste fluorestsentsvärvi kandvate antikehadega. Fluorestsentsmikroskoobi all muutuvad bakterite vastu otsitavad antikehad seega nähtavaks. FTA-ABS test, nagu ka TPPH test, on positiivne teisel nädalal pärast nakatumist ja jääb serooniarmi mõttes positiivseks aastaid pärast kliinilist paranemist. Ravi ja progressi jaoks kasutatakse VDRL-testi (suguhaiguste laboratoorset testi), tuntud ka kui kardiolipiini flokulatsioonitesti. järelevalve. Seda süüfilise testi kasutatakse lipiidispetsiifiliste antikehade tuvastamiseks, mis taanduvad naha manifestatsioonide paranedes. Kardiolipiin on antigeen, mis ekstraheeritakse süda veistest ja seotud kolesterooli osakesed. Laetud osakesed viiakse kokku patsiendi seerumiga. Positiivsel juhul toimub flokulatsioon (aglutinatsioon). See test muutub positiivseks 4-6 nädalat pärast nakatumist või 1-3 nädalat pärast esmase toime ilmnemist. Lipiidispetsiifiliste antikehade hulk väheneb kiiresti, kui süüfilise välised sümptomid paranevad ja pärast edukat ravi neid enam ei esine. Selle koguse (tiitri) abil saab hinnata, kas ravi oli edukas või kas süüfilist raviti ebapiisavalt. Kuid VDRL-test võib olla positiivne ka teiste haiguste suhtes, seega on see süüfilisele omane, kuid mitte spetsiifiline. CSF-test tehakse süüfilise neuroloogiliste sümptomitega patsientide neurosüüfilise kinnitamiseks ja asümptomaatilise neurosüfilise tuvastamiseks või välistamiseks. Ainult CSF-i antikehad, mis on toodetud ka kesknärvisüsteemis, osutuvad neurosüüfiliseks, kuid mitte seerumist CSF-i migreerunud antikehad. Seda saab määrata CSF-i ja seerumi antikehade tiitrite võrdlemisega. Kui CSF tiitri ja seerumi tiitri suhe ületab 2, kahtlustatakse neurosüüfilist. Süüfilis võib avalduda mitmel erineval viisil, eriti naha sümptomid võib olla väga erinev: „süüfilis on nahahaiguste hulgas ahv“, st see võib võltsida peaaegu kõiki nahahaigusi. Mõnikord aetakse Roseola syphilitica segi ravimite eksanteem, mis on tulemuseks ravimitalumatus. Valus haavand molle, põhjustatud bakterist H. ducreyi ja muud naha muutused põhjustatud infektsioonidest (nt granuloom venerum) tuleb eristada haavand kõva.
